食用菌母种培养基的制作方法
食用菌母种培养基的制作方法 食用菌母种用培养基均含有天然植物材料的浸出液,如最常用的马铃薯、麸皮、米糠等的浸出液。这类材料均先用清水煮沸萃取,取其滤液,用滤液在煮琼脂,下面以通用培养基基中的马铃薯酵母粉综合培养基为例讲述培养基的制作方法。(培养基配方请点击) 1、准备材料: 选取没有发芽的马铃薯,洗净去皮,称取200克,并将其切成1-2毫米均匀的片状。同时准确称量好其他成分:葡萄糖20克,磷酸二氢钾2克,硫酸镁0.5克,琼脂20-30克,酵母粉4-6克(溶于少量水中)。 2、煮沸: 将切好的马铃薯片放入1000毫升水中,用铝锅煮沸30分钟,马铃薯酥而不烂。煮沸中尽量不要搅动,以免打碎马铃薯而使培养基沉淀物过多。 3、过滤: 马铃薯煮到酥而不烂时(大约煮沸30分钟)停火,用2-4层纱布过滤。 4、用滤液融化琼脂 琼脂有两种,一种是琼脂条,一种是琼脂粉。一、使用琼脂条时可提前用剪刀剪成2厘米左右长的小段,放在水中浸泡30分钟。然后把多余的水倒掉,这样一是琼脂融化的比较快,二是不需要再补水了,(在煮沸过程中会蒸发200-300毫升的水。琼脂浸泡过程中正好会吸收200-300毫升水)。二、使用琼脂粉时先融化在少量的水里(200-300毫升,在煮沸过程中会蒸发200-300毫升的水,水量相抵,正好是1000毫升)。煮琼脂时,要多搅拌,边煮边搅,直至完全融化。煮沸后要文火,以防溢出。 5、加入全部组分后定容 琼脂完全融化后,将各组分完全加入,并定容至1000毫升,用玻璃棒搅拌,使其均匀。 6、调节PH 加入全部组分定容后,用PH试纸测定培养基的PH,若不适,可用柠檬酸或食醋调低,用氢氧化钠、碳酸钠或石灰调高。在我国多数地区,使用自然水制备培养基时,自然PH值多在6.2-6.8,不需要再格外调节。 7、分装 调好PH值后,即开始分装。食用菌母种常用的试管规格是18-20厘米(长)×18-20毫米(口径)。分装时,注意流出的培养基不可沾到近试管口的壁上,以防日后生霉。 8、灭菌 试管塞上棉塞或硅胶晒后分装打捆,直立放于灭菌锅中灭菌。灭菌时培养基制备的重要步骤。灭菌是否彻底,是培养基制备成功与否的关键。初次使用高压锅时,要事先认真阅读使用说明,并严格按说明操作。 9、摆放斜面: 一般情况下,打开锅后,不宜立即摆放斜面,以免形成过多的冷凝水。高温季节开锅后自然降温30-40分钟较好,低温季节则20分钟左右为宜。试管斜面的大小以上限距棉塞3厘米左右为宜。斜面摆成后。不宜在行摆动。斜面固定后,抽取20支试管置28℃培养箱内恒温培养24-48小时,以检查灭菌效果。培养后若培养基上无微生物长出,表明灭菌成功,即可使用。当时不用的试管斜面克保存于清洁干燥处,以后可以随时取用。